专利方法学1:多重探针熔解曲线法(MMCM)检测原理
多重探针熔解曲线法(MMCM,Multiprobe Melting Curve Method)采用双标记寡核苷酸探针对多重PCR扩增产物进行熔解曲线分析。
在每个荧光检测通道内,通过具备相同荧光基团的两个或多个双标记寡核苷酸探针与目标序列杂交形成双链通过调整反应体系中的引物浓度,形成不对称PCR,产生了大量可与探针互补的反义链,扩增完成时,荧光信号最强。
之后对扩增产物进行升温检测,杂交在产物上的探针与靶标序列逐渐解离,荧光信号逐渐减弱,当达到某一温度时,双链DNA迅速解链,荧光信号骤降,该温度下有一半的双链DNA解链,通过绘制温度与荧光信号的变化曲线图,即可进行熔解曲线检测分析。
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